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抑菌试验_图文_百度文库

  抑菌试验_医药卫生_专业资料。实验三 牛津杯法抑菌试验 (杯碟法) ?扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。 ?由于扩散法操作简单,成本低,已经被大多数 实验室和基层单位所采用 BETTER ? 稀释法包括试管稀释法和微量稀释

  实验三 牛津杯法抑菌试验 (杯碟法) ?扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法。 ?由于扩散法操作简单,成本低,已经被大多数 实验室和基层单位所采用 BETTER ? 稀释法包括试管稀释法和微量稀释法,通 过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的 生长情况,判断其最低抑菌浓度(MIC)。 ? 扩散法 一、实验原理 ? 将培养基平板置培养箱中培养,一方面试验菌(指 示菌)开始生长繁殖;另一方面抗生素呈球面扩散, 形成递减的梯度浓度,离杯越近,抗生素浓度越大, 离杯越远抗生素浓度越小。 ? 在牛津杯周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制, 形成透明的抑菌圈。 ? 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度 (药敏实验)或药物对指示细菌的抑菌程度(抑菌 试验)。 一、实验原理 ? 抗生素浓度越高,抑菌圈越大。 ? 在抑菌圈的边缘处,琼脂培养基中所含抑菌 物质的浓度即为该菌悬液中对该种指示菌的 最低抑菌浓度(MIC) 。 ? 抑菌圈直径与药物对测试菌的最低抑菌浓度 呈负相关,即抑菌圈愈大,MIC愈小。 二、实验材料 ? 培养基: 牛肉膏蛋白胨固体培养基 ? 菌种: 大肠杆菌(i) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) ? 药品:阿莫西林、黄芪多糖、 ? 其他:牛津杯、培养皿、酒精棉、酒精灯、涂布器、 移液枪、 1mL、200uL 枪头、 恒温培养箱、 超净工 作台、接种环 牛津杯 ? “牛津杯”是放被测抗生素的不锈钢小管, 小管内径为6mm,外径为8mm,高10mm的 圆筒形管子,管子的重量尽可能相等。 三、实验操作 1. 倒平板:将已灭菌的琼脂培养基加热到完 全融化,倒在培养皿内,每皿约20ml,凝 固。 2. 标记:菌种、牛津杯摆放位置、药物及其 浓度 3. 制备菌悬液:用生理盐水洗下试管内的菌 苔并稀释。 4. 菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,用 涂布器涂布将菌液涂布均匀 5. 摆放牛津杯:在培养基表面垂直摆放牛津 杯,轻轻加压,使其与培养基接触无空隙。 6.加入待检药液:在杯中加入不同稀释度的药 液或待检样品。 7. 孵育:加满后在37 ℃培养16~18 h。 8. 结果报告:用毫米尺量取抑菌圈直径,参 考表的标准判读结果,按敏感(S)、中介 (I)、耐药(R)报 注意事项 ? 在超净工作台中或酒精灯旁操作 ? 平板倒好,一定要平 ? 牛津杯立直,才能保证杯内抑菌物质均匀 的向四周扩散 ? 牛津杯均匀摆放于培养基上,位置安排适 中,防止出现抑制圈重叠,可在平皿中央 摆一个,外周等距离摆5-6个。 思考题 ? 青霉素、头孢菌素类药物的抗菌机制如何? 药敏试验 ? 抗菌药物敏感性试验,简称药敏试验,是 指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验, 测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制 作用,以指导选择治疗药物和了解区域内 常见病原菌耐药性变迁,有助于经验性治 疗选药

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